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按照实验方法的不同可将致瘤实验分为体外致瘤试验和体内致瘤试验两种，为保证实验的准确性， hUCMSC注射液的致瘤性分析一般需要体内、体外实验同时进行，相互验证。造血干细胞存储
(一)体外致瘤试验：采用软琼脂克隆形成试验法
1.设计原则及方案，体外致瘤性是指将待检细胞接种到软琼脂上进行长期培养，连续3周观察接种的细胞是否能在软琼脂上形成桑葚状的克隆团，以此来间接证实该细胞是否具有肿瘤细胞致瘤的特性。
2.操作方法
(1)阳性对照的制备：取状态良好的对数生长期的Hela细胞，消化后用含胎牛血清的RPM640/MEM完全培养液制备成一定浓度的细胞悬液备用。
(2)阴性对照的制备：制作方法同上，只是细胞换成MRC-5细胞。造血干细胞存储
(3) hUCMSC的准备：用含胎牛血清的DMEM/F12完全培养基调整 hUCMSC成一定浓度备用。
(4)软琼脂的制备：分为底层琼脂制备和上层琼脂制备。先用蒸馏水分别配制两个不同浓度的低熔点琼脂糖液，高压灭菌后，置于40℃温水中而保持不凝固，然后等体积将高浓度琼脂糖和含2倍胎牛血清的 DMEM/F12培养基混匀，取2ml混匀的琼脂培养液加入6板的每孔中，不能有气泡，室温静置凝固备用。分别将低浓度琼脂培养液与制备好备用的细胞等体积混匀，均匀地铺在有底层琼脂的6孔板中,1m/孔，静置后镜下观察细胞分布是否均匀。将培养板置37℃5%CO2培养箱中培养。每周1次镜下观察是否有克隆形成，并且拍照记录，连续观察3周至阳性对照生长出明显克隆为准。造血干细胞存储
3.判定标准及注意事项一般肿瘤细胞经过1-3周的培养在上层琼脂内可见桑葚状克隆团形成，镜下观察可见克隆内的细胞呈透亮的圆形团状。一般认为由16个细胞以上组成的细胞团为一个克隆，克隆团内的细胞数目随着培养时间延长而增多。如果见细胞成颗粒状且轮廓不清楚，说明细胞已死亡。如连续3周仍未见克隆团形成，则考虑接种的细胞没有肿瘤特征，间接反应该细胞的移植后无致瘤性。
