目前,西安牙髓细胞库已经对 UCMSC的形态特征、生长特性、细胞周期、分化潜能、免疫表型、分化潜能、分泌功能及免疫调节等基本生物学特性有了较为深入的认识,总体来讲,从骨髓、脂肪、牙髓、胰腺、肌肉、胎盘和脐带等不同来源的间充质干细胞具有类似的生物特性和功能但在含量、表型特征、增殖能力等方面 UCMSC也有自己的一些特点和优势。脐带组织中富含间充质、神经及内皮等多种干细胞,其中间充质干细胞来源分3种:①来源于华尔通胶;②来源于脐血管周围;③来源于脐静脉血管内皮下。 西安牙髓细胞库UCMSO在脐带中的空间分布包含间充质基质细胞五个独立的区域:①新鲜脐血单核细胞中可分离20%~50%的间充质干细胞;②脐带静脉内皮下可分离出间充质干细胞;③酶消化脐静脉外层可分离获取间充质干细胞如外周血管区域;④血管内可持续产生间充质干细胞;⑤羊膜下区有间充质干细胞末存在。
UCMSC具有贴壁生长的特性,特别适应于塑料培养瓶贴壁培养,因此在 UCMSC研究中多采用塑料培养瓶或培养板进行分离培养。 UCMSC单细胞悬液一般通过酶消化法获得,常用胰酶、胶原酶(I、Ⅱ型)透明质酸酶联合消化,消化方式可将组织剪碎成1mm3以下的微组织块后采用热消化和冷消化2种方式。组织块接种培养法也是一些学者喜欢使用的方法之一,其特点是操作简便、对细胞损伤小、分离培养成功率高。西安牙髓细胞库 UCMSC可在多种基础培养基添加胎牛血清的完全培养基中生长,本实验室使用 DMEM/F12基础培养基进行UCMSC分离培养取得良好效果,建议推广采用。短期培养(1~3代)可在基础培养基的基础上添加胎牛血清或人脐带血混合血清即可。长期传代培养建议添加SCF、FGF、bFGF等维持 UCMSC“干性”和促进生长的因子,这些因子可提高扩增效率和增加传代次数并维持其基本生物特性不发生改变。
针对 UCMSC的体外扩增需求,由专业化生物技术公司在近些年研发出来并进入市场的无血清 UCMSC培养基用于 UCMSC分离、扩增也具有良好的性能,完全可以替代含胎牛血清的培养基。由于用于临床治疗研究的 UCMSC细胞培养应尽量避免使用含有血清的培养基,采用无血清培养基进行UCMC体外分离、扩增是未来UCMSC转化应用研究的主要方向。西安牙髓细胞库有一些报道认为,血小板生长因子或血小板裂解液可以替代血清进行 UCMSC分离培养,但长期培养效果不如添加胎牛血清的培养基,但值得在此基础上进一步改良。大规模、规范化、标准化体外制备 UCMSC,是实现临床规范治疗和保证疗效、安全的前提和基础,提高 UCMSC分离、扩增效率的方法主要有添加促生长因子和增加培养面积等方法,一些无血清高效培养基及促生长因子正在研发之中,以增加培养面积为目标的细胞工厂、中空纤维培养系统、微球培养系统、多孔支架材料培养体系正在建立和完善,西安牙髓细胞库相信在为期不长的时间里,更为高效 UCMSC培养体系将不断改进和优化并投入使用。