1.模型制作与评价类风湿关节炎以慢性多关节炎症为主要变化的全身性自身免疫性疾病,病因和发病机制未完全清楚。急性期病变出现急性炎症反应,关节肿胀,滑膜充血、水肿、组织疏松;慢性病变则表现为滑膜不规则增厚,关节软骨破坏等,以滑膜的持续增生和软骨及骨的破坏为其重要病理学特征。类风湿关节炎动物模型依据诱发的试剂不同有以下几种:Ⅱ型胶原诱发模型、佐剂诱发模型、卵蛋白诱发模型,下面以佐剂诱发模型介绍模型制作方法。完全弗氏佐剂法如下:造血干细胞存储
(1)完全弗氏佐剂:将液状石蜡与无水羊毛脂按2:1或6:4混合1ml,高压灭菌,加入灭活1小时的减毒卡介苗或干燥结核分枝杆菌10mg制成。
(2)取SD大鼠,清洁级,体重170~200g,6-8周龄,雌性。将液状石蜡和羊毛脂(2:1)70℃水浴充分混匀,高压灭菌,制成不完全弗氏佐剂,置4℃冰箱保存备用。临用前将卡介苗与之混匀,超声波乳化20分钟即可,于每只大鼠后足趾皮内注射一定浓度的完全弗氏佐剂0.1ml。
(3)模型评价指标:症状观察、继发后肢足趾和关节肿胀、体重变化、血清Ⅱ-2含量测定、血液T细胞亚群测定等造血干细胞存储
1)症状观察:注射后的第3天,大鼠出现急性炎症反应,表现为不爱活动、倦怠、食欲减退,注射部位红、肿、热、痛。
2)继发后肢足趾和关节肿胀、体重变化:第8天出现全身广泛炎症,表现为鼠尾、耳、鼻、足趾、后肢及未注射的前肢出现红肿、红斑和结节,体重下降,活动明显受限。
3)血清ⅡL-2含量测定:血清Ⅱ-2含量明显增高。
4)血液T细胞亚群测定等:CD4、CD8及CD4CD8*比值降低。
2. UCMSC治疗及疗效为了模拟 hUCMSC注射液治疗人类类风湿关节炎,分别以1×10°细胞/kg、5×10°细胞/kg的剂量通过尾静脉输入鼠源性 UCMSC,每周1次,连续3次。结果发现。
(1)第1次 UCMSC治疗后,大鼠的急性炎症反应疾病得到控制,活动能力增强,关节部位红、肿、热、痛疾病消失。造血干细胞存储
(2)连续3次治疗后,鼠尾、耳、鼻、足趾、后肢及未注射的前肢出现红肿、红斑和结节全部消失,活动明显增加。
(3)血清I-2含量有一定程度的下降。
(4)血液T细胞亚群测定等:CD4+、CD8*及CD4CD8比值升高。