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脐带间充质干细胞的生长特性及表型特点-西安脂肪细胞库

2021-12-30 14:02:23

UCMSC在消化制备的细胞悬液中呈圆形,接种于培养瓶中一般在24小时左右开始贴壁,西安脂肪细胞库贴壁生长初期呈梭形、多边形或多角形,随着细胞增殖和数量增加,逐渐变成成纤维细胞样梭形,达到80%~90%融合时基本呈长梭形。原代培养的 UCMSC中并非全部都是均一细胞,可能含有少量的多个核、小圆形细胞和成纤维细胞。采用组织块培养法分离 UCMSC般在7天左右有零星细胞爬出,在第10天左右(8-14)会有大量细胞从组织块中爬出,初期沿组织块周围呈出芽式向外生长,细胞呈短梭形,逐渐伸出长足,继续培养5-7天时呈放射状生长,根据接种组织块的密度不同,达到80%细胞融合的原代培养时间在2~3周。

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传代培养的 UCMSC一般在24小时左右开始贴壁生长,初期呈圆形、多边或多角形,贴壁后的潜伏生长期为3~5天,指数增殖期为4~7天,细胞呈克隆式、放射状、火焰状或螺旋状生长,随着细胞数量不断增多,生长空间逐渐减少,细胞相互汇合成片,达到90%细胞融合的时间为5~7天,细胞形态基本呈长梭形成纤维细胞样。细胞倍增时间为30小时,指数增殖期后应再次收集细胞和进行传代培养,否则细胞进入生长平台期,西安脂肪细胞库即细胞生长至相互接触后会抑制细胞运动,再加之细胞生长空间限制,细胞处于生长停止期,虽然细胞生长速度减慢,但代谢活动仍然继续,如果继续培养则可能因为营养不足、代谢产物积累、pH值下降等导致细胞中毒,出现细胞形态改变,细胞收缩、脱落、漂浮和死亡。随着 UCMSC传代培养次数的增加,杂细胞逐渐被稀释,比例逐渐减小,第3~5代的 UCMSC基本形态均一, UCMSC纯度达到9%。指数增殖期,人脐带MSC在体外培养体系中能快速增殖,传代后3-5天能增殖4~5倍,传代培养10代以上细胞可增加510倍,且增殖速度无明显降低,传代稳定。细胞周期分析表明,C0~G1期和G2M期所占比例分别为78.84%11.16%

流式细胞仪分析证明MSC细胞表达CD44CD105,整合素受体CD29CD51及间质干细胞受体SH2SH3,但不表达造血系标志CD34CD35。增殖特性:RT-PCR检测结果显示,UCMSCOct4mRNA表达阳性,而Oet4是胚胎干细胞特异性基因,对胚胎干细胞的建系及维持干细胞未分化状态具有重要意义。因为西安脂肪细胞库 UCMSO既表达MSC的细胞表面标志,又表达胚胎干细胞的部分标志,它们之间既有联系又有差异,因此可能既非胚胎干细胞又非成体干细胞,而是处于两者之间的一类新的多能干细胞。根据国际细胞疗法间充质与组织干细胞R(the Mesenchymal and Tissue Stem Cell Committee of the International Society for Cellular Therapy)2006年提出的低标准,MSC需满足以下条件:①MSC在标准培养条件下呈贴壁生长;②MSC表达CD05CD73CD90,不表达CD45CD34CD14CD1lbCD79aCD19HLA-DR③MSC在体外至少能向成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞分化。西安脂肪细胞库和其他来源的MSC一样, hUCMSC呈长条梭形贴壁生长,表达CD73CD90CD105CD166CD10CD13CD29CD44HLA-ABC,不表达CD34CD45CD31等造血干细胞标记或CD33CD4CD56HLA-DRHLA-DAHLA-DPHLA-DQ,体外诱导培养能向多种成体细胞分化。

比照这些条件,华尔通胶来源的间质细胞具有MSC特性, UCMSC的培养、鉴定也应至少满足上述低标准。 hUCMSC还表达原始干细胞标记,如白血病抑制因子受体通路胚胎干细胞特异基因及端粒反转录酶及 NanogSTAT3APOct4BMP4PAX6ADAM12NestinHLA-IhUCMSC低表达移植相关的细胞表面标记CD80CD86CD40CD4OL等。在混合淋巴细胞检测中呈免疫抑制,西安脂肪细胞库并抑制T细胞的增殖,异体移植该细胞可产生免疫耐受性,表明其为一类免疫缺陷细胞,异基因移植不会发生免疫排斥反应。总之,在 UCMSC的鉴定方面, UCMSC应从形态特征、生长特性、表型标志、分化潜能、分泌功能、免疫调节能力及疗效等方面建立系统、全面的评价技术和标准。


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