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UCMSO的复苏应以很快的速度升温，在1-2分钟内达到恢复到常温水平，防止细胞内形成冰结和高浓度电解质而对细胞造成损伤。由于DMSO在常温下对细胞有一定毒性作用，复温后的细胞悬液立即处理，通过离心洗涤尽快去除DMSO。冷冻保护的效果与冷冻速度冷冻温度和复苏温度有密切关系，西安脐带干细胞存储只要操作得当，复苏后的 UCMSC仍然保持其正常的结构与功能，体外生长特性不发生明显改变。 UCMSC的复苏方法如下：
1.在实验内预先准备40℃水浴(用100ml塑料烧杯装40℃温水50m1)镊子(用于转移冻存管)、loml离心管、0.9%的生理盐水、DMEM/F12培养基、胎牛血清或人脐血血清、SCF、EGF、bFGF、吸管、移液管、一次性吸头、培养瓶等。
2.从液氮中取出装有细胞的冻存管，立即放入温水中，轻轻摇晃使冻结细胞在2分钟左右融化。为保证细胞的活性，可将冻存管置于-80℃冰箱中放置30分钟，使液氮蒸发后再转入温水中，同时避免冻存管爆裂危险。
3.将融化后的细胞迅速转移至超净工作台，西安脐带干细胞存储用酒精棉球将冻存管擦拭干净，用吸管将细胞悬液转移到离心管中，加入5ml预热至37℃的培养液，加入1ml培养液至冻存管中冲洗管壁并转移至离心管中，反复冲洗2次，轻轻振荡混匀试管内的细胞悬浮液。
4.300g离心10分钟，用吸管去除上清，加入3m完全培养基，轻轻震荡或吹打使细胞重悬混均匀。
5.计数活细胞数量和比例，将细胞悬液接种于T75塑料培养瓶中，加入20ml完全培养基。
6.摇晃培养瓶使细胞均匀分布于瓶底，将细胞置于37℃、5%CO2饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。
7.每3天观察细胞生长情况并换液，也可在第2天细胞贴壁后换1次液，好处是可以去除死细胞及其对正常细胞的影响。待细胞生长至80%~90%融合时收集细胞，西安脐带干细胞存储按常规弃培养上清，用平衡液或生理盐水洗涤，胰酶消化，离心洗涤，计数活细胞，用完全培养基稀释，按1:3的比例接种于新培养瓶中进行传代培养，收集1瓶 UCMSC后，接种于3个相同面积的新培养瓶。
8.传代培养后的 UCMSC生长速度远快于原代 UCMSO，一般45天即可达到80%~90%的细胞融合度，此时可继续收集继续传代培养或冻存。
