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1.取体外传代培养至第3代的人脐带间充质干细胞，用6孔细胞培养板和完全培养基进行传代培养，带细胞生长密度达到70%时开始进行诱导培养，设3个复孔，同时设对照孔。
2.管吸岀培养液，加亼复方电解质衡液3ml，造血干细胞存储轻轻晃动使死细胞及细胞碎片漂浮，然后吸除上清液,反复2次。
3.加入诱导培养基3ml，培养体系为：高糖DMEM基础培养基、10%胎牛血清、10ngbFGF、1 umol/β-巯基乙醇。
4.诱导培养7天。
5.更换为含10%胎牛血清、20 ng/ml bFGF、20 ng/L EGF，lμ mol/mlB-巯基乙醇、造血干细胞存储10 umol/ml尼克酰胺的高糖DMEM培养基，继续培养6~7天。
6. insulin和C肽表达分析将诱导好的细胞用4%多聚甲醛固定10分钟→加入3%H2O2→静置5分钟→PBS冲洗5分钟×3次→在标记好的孔中分别加入鼠抗人 insulin和C肽抗体→4℃过夜→PBS冲洗5分钟×3次→滴加荧光二抗→37℃孵育20分钟→用PBS洗涤5分钟×3次→光镜下观察并排照记录。
7.特异性基因Pdx/1、造血干细胞存储 NeuroD1、Ng/3转录分析设计、合成引物，购买反转录PCR试剂盒，提取总RNA，按试剂盒操作说明书的操作程序进行实验，将RNA反转录为cDNA以cDNA为模板进行PCR反应，凝胶成像系统观察并拍照记录。
8.诱导培养过程中每2天1次在倒置相差显微镜下动态观察细胞生长和形态变化并拍照记录(图6-9)
