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1.取体外传代培养至第3代的人脐带间充质干细胞，用6孔细胞培养板和完全培养基进行传代培养，带细胞生长密度达到70%时开始进行诱导培养，设3个复孔，同时设对照孔。
2.吸管吸出培养液，加入复方电解质衡液3ml，轻轻晃动使死细胞及细胞碎片漂浮，造血干细胞存储然后吸除上清液,反复2次。
3.加入诱导培养基进行诱导培养。诱导培养基：无血清 neurobasal培养基，含2%N2/B27, 10ng/mIEGF, 10ng/mIbFGF。
4.置于5%CO2、温度37℃、造血干细胞存储饱和湿度的细胞培养箱中进行静置诱导培养，每3天按上述浓度补充诱导因子1次，每6天换1次培养液，连续18天，动态观察细胞形态变化。
5.更换培养液为神经元细胞诱导培养基，培养体系为：含5%胎牛血清的DF12培养基添加诱导因子,10 ng/mlEGF,10 ng/mlbFGF,10 DuM Forskolin,0.5uM全反式维A酸,01mMIBMX,1Ong/ MIBNDF。
6.置于5%CO2、温度37℃、饱和湿度的细胞培养箱中进行静置诱导培养8天，每3天换1次液，观察细胞形态学变化并拍照记录。
7.用 Nestin、 NeuroD1、MAP2、NF-M单克隆抗体对诱导细胞进行免疫组织化学染色。造血干细胞存储方法：用吸管去除培养液→PBS漂洗3次→4%甲醛固定30分钟→用兔血清封闭→加入一抗(NES和MAP1:50, NeuroD1和NFM1:100)→于4℃条件下浮育过夜→加入PCT标记二抗→于室温条件下浮育30分钟→光学显微镜下观察并拍照记录(图6-8)。
