电 话：xxxx-00000000
传 真：xxxx-000000
邮 箱：xxxxx.cn
地 址：xxxxxxxxxx
(三)细胞保护剂
1.渗透性细胞内冷冻保护剂，可以渗透到细胞内，一般是一些小分子物质，主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等，经常使用的是甘油、DMSO。
2.非渗透性细胞外冷冻保护剂不能渗透到细胞内，脐带干细胞存储一般是些大分子物质，主要包括聚乙烯吡咯烷酮(PV)蔗糖、聚♂二醇、葡聚糖、白蛋白以及羟乙基淀粉(HES)等。
白蛋白不仅具有维持血浆胶体渗透压和结合离子的能力，起到维持细胞外液的渗透压平衡的作用；而且人血白蛋白本身所带静电荷为负电荷，能够起到防止细胞集聚而处于分散状态的功能，另外，人血白蛋白是临床常用药物，容易获取且质量可以得到保障，加入到干细胞制剂中使用相对安全。
(四)细胞冻存方案的选择
1.传统的细胞冻存方法选取鉴定合格的 hUCMSO，脐带干细胞存储用0.25% trypsin-EDTA消化，完全培养基终止，离心去除上清，加入细胞冻存液(10%DMS0、5%甘油、85%的含20%FBS的完全培养基)并悬浮混匀细胞调整细胞浓度为5×10°个/ml，分装入无菌冻存管中，冻存管上清楚标注细胞名称、产妇名字、批号和冻存时间并详细记录存档；将冻存管放入程序降温盒中置于-70℃冰箱4小时后转入-1%6℃液氮罐中保存备用。使用时复苏细胞，离心漂洗后再使用。
2. hUCMSC注射液细胞冻存方法在经检验合格符合GMP生产条件且具备完整的干细胞制剂制备质量管理体系的细胞工程实验室无菌条件下选取鉴定和检验合格的hUCMSC，使用临床应用的0.25% trypsin-EDTA消化收集细胞生理盐水洗涤3遍后，加入临床注射用的细胞冻存液(10%临床级DMSO、5%人血白蛋白、低分子肝素钙10501U/4×10个细胞、85%复方电解质注射液)并悬浮混匀细胞，调整细胞浓度为2×10个m，分装入临床用无菌冻存袋中，每个冻存袋装入20ml，冻存袋上清楚标注细胞名称、产妇名字、批号、脐带干细胞存储冻存时间和冻存数量并详细记录存档；把冻存袋放入程序降温仪中完成程序降温后转入-196℃度液氮罐中保存备用，临床上使用前直接从液氮中取出放入37℃专用孵育箱中复苏，然后用生理盐水5倍稀释后使用。该方法本实验室也只在猕猴身上实验，未发现明显不良反应，但要在临床上推广使用还需进行大量研究。
