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1.主要试剂
(1)脐带间质干细胞成骨诱导分化培养基：脐带间质干细胞成骨诱导分化基础培养基175ml胎牛血清20ml、双抗2ml、谷氨酰胺2ml、抗坏血酸400μl、β-甘油磷酸钠2ml、地塞米松20pl。
(2)其他：茜素红染液、六孔板、明胶、PBS、西安干细胞公司中性甲醛。
2.步骤
(1)明胶包被：加入足量的01%的无菌明胶溶液，使之覆盖整个六孔板，室温放置30分钟以上，使用前尽量吸去明胶溶液。在洁净工作台中打开盖子，让残留的明胶溶液全部风干(不超过30分钟)。
(2)当培养的脐带间充质干细胞融合度达到80%~90%时，胰酶消化收集。
(3)将消化下来的脐带间质干细胞按照2×104clsm2。的细胞密度接种在事先包被0.1%明胶的六孔板中。将细胞置于37℃,5%CO2的培养箱中进行培养。
(4)当细胞融合度达到60%~70%时，小心的将孔内完全培养基吸走，西安干细胞公司向六孔板中加入2ml事先配置好的脐带间充质成骨诱导分化培养基。
(5)每隔3天换用新鲜的成骨诱导分化培养基。诱导2~4周。
(6)成骨诱导分化结束后，吸走六孔板中的成骨诱导分化培养基，用PBS冲洗1~2次每孔加入2ml4%中性甲醛溶液固定30分钟。
(7)吸走中性甲醛溶液，用PBS冲洗2次。每孔中加入1ml茜素红染液染3-5分钟。
(8)吸走茜素红染液，西安干细胞公司用PBS冲洗2~3次。
(9)将培养板置于显微镜下观察成骨染色效果，并拍照。
3.结果分析脐带间充质干细胞经成骨诱导分化后，诱导形成的钙质结节可被茜素红染成红色(图6-6)。
