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1.主要试剂
(1)脐带间质干细胞成软骨诱导分化培养基：脐带间质干细胞成软骨诱导分化基础培养基175ml、抗坏血酸60ul、mS添加物2ml、TGF-β32ml丙酮酸钠200μ、脯氨酸200ul。造血干细胞存储
(2)其他：阿新蓝染液、15m离心管、PBS、中性甲醛。
2.步骤
(1)当培养的脐带间充质干细胞融合度达到80%~90%时，胰酶消化收集。
(2)对消化后的细胞计数，将计数后的细胞转移到15ml离心管中。
(3)调整为75×10°lsml的密度重悬间质干细胞，室温下150g离心5分钟，吸去上清。
(4)用成软骨诱导完全培养基按照50×105clml的密度进行重悬。
(5)吸取0.5ml(2.5×10cll)细胞悬液转移到15ml离心管中，室温下150g离心5分钟。造血干细胞存储此步骤不需要吸掉上清并重悬细胞。
(6)拧松离心管盖以便于气体交换，将其放置于37℃,5%CO2的培养箱中培养。24小时内不要摇动离心管。
(7)每隔2~3天需要给细胞换用新鲜的成软骨诱导分化完全培养基(为防止软骨球在换液时被吸出，建议在吸管前段加上一个1~200ul的枪头)，每管0.5ml。
换液之后，轻弹离心管底部使软骨球脱离管底悬浮在液体中。拧松离心管盖放入37℃,5%CO2培养箱中培养。
(8)诱导培养14~28天。对软骨小球进行甲醛溶液固定和石蜡包埋，进行阿新蓝染色并拍照。
3.结果分析脐带间充质干细胞经成软骨诱导分化后，分化形成的软骨胶原基质被阿甲新蓝染成蓝色(图6-7)。
事实上，不断深入的基础研究证实： UCMSO在体内特定的组织微环境或体外特定的诱导培养条件下，可以跨胚层分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，这种强大的分化潜能使其成为组织工程再造的最佳候选者。虽然按照国际细胞治疗协会提出的“间充质干细胞的标准”，确定细胞可以诱导向脂肪、造血干细胞存储骨和软骨细胞分化，就可以鉴定是 UCMSC了，但这只能说明其具有多向分化能力，没有体现其跨胚层分化能力，因此建议在此基础上增加向神经、胰岛等多胚层组织细胞分化潜能分析。
