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【西安干细胞公司】外泌体的产生和释放

2023-06-08 14:20:27

目前为止,间充质干细胞( mesnchymal stem cell,Msc)被证明是产生外泌体能力强的细胞。MSC来源的外泌体(MSC-exo)的产生机制和其他细胞来源的外泌体一致都是通过核内体途径。外泌体在核内体系统中的形成包括位于细胞膜周围早期核内体( earlyendosome,EE)的形成和位于细胞核周围晚期核内体( late endosome,LE)的成熟,晚期核内体也称多泡体( multivesicular body,MVB)。早期核内体形成后,其界膜向内出芽,吞没一部分胞质成分伴跨膜蛋白及膜周蛋白内陷,形成含有一些囊泡的次级核内体(也叫作晚期核内体或者多泡体)西安干细胞公司这个过程依赖于转运必须内体分选复合物( ESCRT)的作用, ESCRT系统包括 ESCRT-0 ESCRT-I ESCRT-Ⅱ ESCRT-Ⅲ4个蛋白复合物。主要过程包括 ESCRT-0结合到早期核内体的质膜表面,并通过其泛素化结合位点与早期核内体中的特异性物质结合,再通过位于结合位点上游的 ESCRT-I ESCRT-Ⅱ作用向内形成出芽小泡,之后在 ESCRT-Ⅲ的剪切作用下与核内体膜分离。这4个蛋白复合物相继发生作用,之后召集并与衔接蛋白Alⅸx连接,促进囊泡出芽。膜上的同线蛋白和蛋白多糖也发挥着重要作用,Alix与同线蛋白结合,而蛋白多糖与CD63结合。抑制 ESCRT、同线蛋白、Aix以及蛋白多糖都能导致外泌体的分泌减少。晚期核内体行程中可以分选包裹不同蛋白、 mirNAmRNA Incana,而形成后有两种命运。一是与溶酶体结合,将内容物降解,二是与细胞膜结合,将囊泡以外泌体的形式释放到胞外。西安干细胞公司目前,外泌体内容物的选择机制尚不清楚,除了 ESCRT依赖途径,有硏究提岀外泌体的产生也依赖于4次跨膜蛋白和神经酰胺,认为MSC-exo来源于MSC质膜中产生内吞作用的脂筏区。外泌体的释放主要由Rab家族蛋白调节,其中Rab27aRab27b是主要的调节子;其次,Rab35Rab1l通过与10AC结合也能调节其分泌。

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MSC-exo的悬浮密度为1.10-1.18gm,其膜表面富含胆固醇、鞘磷脂和神经酰胺脂筏脂质及信号蛋白,外泌体内含有多种蛋白质和RNA。这些生物活性物质的种类和数量并不是始终相同,而是随着细胞的生理状态的变化而改变。

MSC=exo包含大多数外泌体共同表达的物质,包括跨膜蛋白和融合蛋白(GTP酶、膜联蛋白、浮舰蛋白)4次跨膜蛋白(CD9CD63CD81CD82)多泡体生成相关蛋白(AxTsSG101)、脂质相关蛋白和磷脂酶。除此之外,MSC-ex还含有MSC表达的黏附分子,包括CD29CD44CD73等。目前发现,MSC-exo一共含有857种蛋白质,西安干细胞公司但并非全部同时表达。在3组独立实验中,通过高精度质谱分析,检测到MSC-exo分别含有379432420种蛋白质,其中只有154种蛋白质共同表达。而本课题组通过超高速离心法分离MSC-exo外泌体和PEG沉淀法分离MSC=exo,并用高精度质谱检测,分别检出169102种蛋白质。可见MC-exo所含蛋白质的种类和丰度受到多种因素的影响,包括外泌体的分离方法、外泌体的保存手段、外泌体蛋白的检测方法细胞的生理生化状态等。因此,MSC=exo蛋白质的种类和丰度仍需进一步研究和分类。但就目前研究资料可知,MSC-exo所含蛋白质充分代表了32种生物过程,包括外泌体生成和免疫。在这些蛋白质中,与治疗作用相关的( PDGFRBEGFR PLAUR)信号分子(RRAS/NRASMAPK1GNA13/可能包括表面受体GNA12CDC42VAV2)黏附分子(FN1EZR IQGAP1CD47、整合素、 LGALSI/LGALS3)MSC相关表面抗原。其中,蛋白酶体20S核心颗粒的7a7βMSC-exo都有表达,且免疫蛋白酶体中的3个亚基表达水平较高,提示MSC-exo损伤修复功能可能与此有关。

MSC-exo含有的RNA大多是核酸数目小于300的小RNA( small rna),其中包括microrNA(简称 mirNA)。通过微阵列杂交技术对比MSCMSC-exo中的 mirNA发现,西安干细胞公司166mRNA中有15种只存在于MsC-exo,106种只存在于MSC,33种在两者中都表达,而有12mRNAMSC=exo的表达是MC2倍。MC-o0不含2818s核糖体,但含有其降解产物mRNA923MSC-exo miRNA主要以前体(pre- mirNA)的形式存在,与MSC细胞相比,其pre- mirNA/ mirNA比率更高,能被RNaeⅢ剪切成成熟的mirNA。这些数据提示我们,MSC-exo并非随机而是选择性的包裹MSC细胞内的小RNA,包括 mirNA、非编码RNA或者RNA降解的中间产物,而不倾向于包裹完整的mRNA或者核糖体RNA


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