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条件培养基的准备
收集含有外泌体的条件培养基是外泌体分离工作的基础，而此处所描述的条件培养基的准备工作对于所有的分离方法都适用。在准备条件培养基的同时，应该收集细胞的全裂解液用作后续分析工作的对照。西安干细胞存储
1.细胞准备，选择生长状态良好且无污染的脐带间充质干细胞(代数越低其分泌能力越好)铺板，完全培养基培养备用。如果采用超高速离心法分离外泌体，通常需要准备至少70ml的条件培养基方够后续分析鉴定工作的开展。因此，推荐采用15cm培养皿或者T175的培养瓶进行细胞培养。
2.更换培养基，当细胞覆盖率达到70%-80%时，去除完全培养基，PBS洗3次，尽弃上清，更换为无血清培养基(不含有FBS)，此步可以选择商品化的间充质干细胞专用的无血清培养基(含有血清替代物，西安干细胞存储可以保持干细胞的生长)也可以采用DMEM/F12基础培养基。
3.细胞培养，在无血清培养体系中继续培养干细胞。对于商品化的无血清培养基，可以根据其相应的说明，调整上述两步。以B公司生产的无血清培养基为例，可以从细胞传代开始就采用无血清培养体系培养细胞，原则是让后收集到的条件培养基不含有外源的外泌体成分。
4.收集培养，上清对于培养体系商品化无血清培养体系，由于其培养体系中不含有任何外源外泌体成分，因此可以根据细胞状态收集干细胞培养上清，西安干细胞存储通常是在细胞长满时收集。而对于不含有FBS的基础培养基，从换上空白培养基开始继续培养细胞48小时后收集培养上清。
5.条件培养基的预处理，用巴士滴管或者吸管(无菌)将条件培养基收集到无菌的50ml离心管中,300×g,4℃，离心10分钟，保留上清。
6.条件培养基的保存，4℃存放可以保存1周，-80℃存放可以保存几个月。但建议将培养基保存在4℃,1周内进行分离提取。因为-80℃保存容易导致外泌体形态上的变化，不利于后续鉴定工作，尤其是电镜鉴定工作的开展。
全细胞裂解液用于后续外泌体分析工作(主要是免疫沉淀实验)的对照，具体实验方法如下：
1.收集细胞，胰酶消化1~2盘/瓶上述用于收集条件培养基的脐带间充质干细胞，终止后计数。
2.离心，将(1~5)×107个脐带间充质干细胞收集到15ml离心管中，西安干细胞存储去上清后用适量PBS重悬细胞，再次300×g,4℃，离心5分钟。去上清，保留沉淀。
3.加入200u(对应1×107细胞数)细胞裂解液，冰上裂解20分钟，在起始和结束裂解时涡旋振荡。
4.收集细胞裂解液,20000×g,4℃，离心20分钟，保留上清。-20℃或-80℃冻存。
